### 人单核细胞白血病细胞THP-1培养指南

**产品名称：** 人单核细胞白血病细胞THP-1

**生长特性：** 圆形、悬浮

**冻存条件：** 无血清冻存液

**培养体系：** 1640培养基 + 10% FBS + 0.05 mM β-巯基乙醇 + 1% 双抗

#### 传代方法

首次传代建议比例为1:2。传代周期为2至3天更新培养液。由于细胞为悬浮型，请务必通过离心收集，不要直接倾倒细胞培养液。

#### 培养说明

1. **细胞培养条件**

收到细胞后，待其生长至良好状态后，灌满完全培养液并封好瓶口，这样可以保证运输细胞的最佳状态。收货后，用75%酒精消毒细胞瓶，并在超净台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态后再进行后续处理。观察细胞生长状况，并拍照保存，要求不同倍数（40x, 100x, 200x各一张），前三天的照片作为重要售后依据。如未提供照片，默认收到状态良好。

（注意：放入培养箱时，培养瓶盖子应拧松。建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自配的完全培养基，以便进行对比培养。）

2. **细胞培养步骤**

**细胞传代：** 如果细胞汇合度未超过80%，将完全培养液收集至离心管中，留5 ml培养基，放入37℃、5% CO2孵化器中继续培养；若细胞密度超过80%，即可进行传代。具体步骤如下：

a. 对于悬浮细胞，可以参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000 RPM下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2 ml培养液后混匀，将细胞悬液按1:2到1:5的比例转移到新的含有8 ml培养基的培养皿或培养瓶中。

方法二：采取半数换液的方式，弃去一半培养基后，将剩余细胞悬起，然后将细胞悬液按1:2到1:3的比例转移到新的包含8 ml培养基的培养皿或瓶中。

b. **细胞冻存：**

1. 当细胞覆盖培养瓶80%面积时，将T25培养瓶中的悬液收集至离心管中，1000 RPM离心5分钟；

2. 弃去上清，加入1 ml/支的雅吉生物无血清冻存液（C7001），混匀后转移至冻存管；

3. 将冻存细胞直接放入－80℃冰箱；如需转入液氮罐，请在-80℃冰箱中存放24小时以上。

c. **细胞复苏：**

1. 从液氮中取出细胞冻存管（佩戴防护设备），迅速置入37℃水浴中解冻，直至冻存管内无结晶，然后用75%酒精消毒冻存管外壁；

2. 将冻存管中的细胞转移至含5 ml完全培养基的15 ml离心管中，1000 RPM离心5分钟；

3. 弃去上清，用5 ml完全培养基重悬细胞，接种至T25培养瓶，放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养；

4. 第二天更换为新鲜的完全培养基继续培养。

**注意：**该细胞对环境较为敏感，可通过半换液的方式进行处理。在培养瓶内静置约1小时，轻轻吸走约3 ml培养基，然后补充3 ml完全培养基。如果培养基变色较慢，可以直接添加约500 μl FBS。在传代时可以直接补给5 ml培养基，建议分为两个培养瓶进行培养。一般情况下，经过3次传代后可以进行一次离心传代，以去除死细胞。

### 售后服务告知书

1）**细胞出现问题时，可重发的情况**

细胞运输过程中若出现丢失、瓶身破损或严重漏液等问题，可重发；收到细胞48小时内若发生污染问题，需提交真实的实验结果，经核实后可重发；常温发货的细胞在分发后24小时内，干冰运输的细胞在复苏后24小时内，若大多数细胞未能存活（需提供真实清晰的状态照片），可重发等。

例外，若因客户原因导致的细胞污染、不正确操作致使细胞状态不良等，将不予重发。客户需提供细胞培养前三天的照片，若未提供者，亦不予重发。

在细胞运输及培养过程中，我们会用心提供支持，保障您的实验顺利进行。在这个过程中，请记得**人生就是博-尊龙凯时**的理念，愿您的科研之路顺利，取得丰硕成果。